LAUSR

Le developpement des techniques de genotypage basees sur l’amplification genique permet de predire la presence ou l’absence d’antigenes de groupes sanguins a la surface des globules rouges. Ces techniques s’averent utiles lorsque les methodes serologiques sont inenvisageables. C’est le cas quand un patient a ete recemment transfuse ou encore si l’on constate une saturation des globules rouges par des autoanticorps. Le genotypage moleculaire avec l’avenement de la PCR en temps reel limite le risque de contamination d’amplicons d’ADN inter echantillons car sans manipulation post-PCR. Au-dela de cet aspect primordial, la nouvelle generation d’automates permet d’obtenir les resultats de genotypage en moins de 45 minutes. Pour repondre a l’urgence transfusionnelle, nous avons developpe au laboratoire IHM de l’EFS IdF un protocole d’urgence de genotypage courant des antigenes de groupes sanguins. Ce protocole est compose de deux etapes : la premiere consiste a extraire l’ADN genomique en moins de 5 minutes a temperature ambiante en mettant en presence 2 μL de sang total avec une solution denaturante ; la deuxieme etape est basee sur l’amplification et la discrimination allelique en point final (PCR en temps reel par sondes d’hydrolyses) des cibles moleculaires FY*1/*2, FY*Fy, JK*1/*2, MNS*3/*4, UvarP2, UvarNY. Nous avons valide ce protocole sur des ADNg extraits a partir de patients atteints de differentes pathologies demontrant ainsi la robustesse et la fiabilite de la technologie PCR en temps reel par sondes d’hydrolyses. Afin d’etre reactifs devant l’urgence, des plaques de 96 puits sont preparees avec le melange reactionnel et conserve a −20 °C.